有毒。在捕食无毒蛇时，眼镜王蛇并不轻易使用毒液，它会随便咬上一口不放，任凭猎物挣扎反抗，直到死后再慢慢吞食。
在捕食毒蛇时，它则不会轻举妄动，而是不断挑衅，当对方终被激怒向它发起进攻时，眼镜王蛇会机警地躲闪，最后猎物身心疲惫、无心恋战时，它看准机会，一口咬住猎物头颈并释放毒液将其杀死。
眼镜王蛇行动敏捷，头部可灵活转动，不但可向前后左右方向攻击，还可以垂直窜起来攻击头顶上方的物体。
咬住东西后常不会轻易撒口，毒液中干毒约100毫克，而平均致死量为12毫克，被咬者会在数分钟内引发肿胀、反胃、腹痛、呼吸麻痹，出现言语障碍，昏迷等症状，人在被咬后的半小时内如没有及时的药物治疗必定死亡。
眼镜王蛇的毒液里主要含有神经毒素，另也包含了心脏毒素。毒素由多肽及蛋白质所组成。
在攻击时，蛇毒注入受害者体内后，毒素会迅速袭击被咬者的中枢神经系统，导致剧痛，视力障碍、晕眩、嗜睡及麻痹等症状；伤者会因心脏血管系统崩溃而进入休克状态；最后会因呼吸衰竭、心跳减弱而死亡。临床个案显示，被咬者也有机会出现肾衰竭的情况。
和别的毒蛇一样，眼镜王蛇毒液的毒性测试结果在不同的毒理学研究中都有不同，因为LD50数据会随着不同的注射及研究方法而产生变化。
实验白鼠皮下注射的1.7mgkg，静脉注射的1.31mgkg及腹腔注射的1.644mgkg为较常被引用的数据。
另一个研究则在五只东南亚野生眼镜王蛇身上得出1.93mgkg（皮下注射）的结果，
也有研究显示，中国眼镜王蛇的毒性为0.34mgkg（肌肉注射）。不同地区的个体的毒性也可能略有不同。
眼镜王蛇的一咬可以迅速致命。它平均能注入200—500毫克的毒液，最大的毒液分泌量甚至能达7ml。被咬者往往需要大量的抗毒血清来对抗蛇毒，阻止毒素进一步破坏身体机能。
更有指眼镜王蛇一口所能注入的毒液能于3小时内杀死一头成年的亚洲象。
被咬伤后的死亡率以及死亡的速度受很多因素影响，如毒蛇所注入的毒液量、被咬位置、伤者的健康状况等。另外，由不同地区组织所作出的调查也可能会给予不同的答案。
例如，虽有一网页报告提到，眼镜王蛇通常都只注入不足以致命的毒液分量，但另一